Analisis PCR: apa yang ia? Bagaimana untuk mengambil analisis PCR

Ia tidak lama dahulu membangunkan kaedah yang boleh dipercayai, sangat sensitif dan cepat untuk diagnosis pelbagai penyakit berjangkit pada manusia. Kaedah ini dipanggil "analisis PCR". Ada apa, apa yang asasnya, apa yang dia boleh mengenal pasti mikroorganisma dan bagaimana untuk mengambil keterangan itu, kita akan menerangkan dalam artikel ini.

Sejarah penemuan

Mencipta reaksi rantai polimerase (PCR) adalah seorang ahli sains Amerika Cary Myullis pada tahun 1983. Pada mulanya, dipatenkan kaedah diagnostik syarikat "Cetus Corporation," di mana dia bekerja dan penciptanya. Tetapi pada tahun 1992 semua hak-hak dan paten telah dijual kepada syarikat "Hoffman-La Roche." Selepas itu, ternyata bahawa kajian yang sama telah dijalankan secara selari dan dilaporkan oleh ahli biologi Amerika Syarikat yang lain, seperti Elis Chen, David Edgar, John RRE. Pada tahun 1980 beliau terlibat dalam isu ini dan ahli-ahli sains Soviet A. Slyusarenko A. Kaledin dan S. Gorodetsky. Oleh itu, untuk menentukan pemilik hak cipta tunggal tidak mungkin. Banyak biokimia tertunggak telah menyumbang kepada pembangunan kaedah tindak balas polymerase dan CERN dipatenkan inovasi mereka. Pada analisis titik ini PCR dijalankan di seluruh makmal khas dilengkapi.

RINGKASAN PCR diagnostik

analisis PCR: apa yang ia dan bagaimana ia berfungsi? Intipati kaedah ini terletak pada hakikat bahawa dengan menggunakan khas polymerase DNA enzim in vitro untuk meningkatkan kadar persekitaran mikrob tertentu. Untuk melakukan bahan DNA ini berulang kali membiak didapati. Oleh itu, kehadiran patogen dalam sampel jumlah itu akan meningkat dengan mengorbankan biokimia manipulasi makmal, dan bakteria tidak akan sukar untuk mengesan dalam mikroskop.

Bagaimana kajian bahan?

Untuk menjalankan analisis yang diperlukan:

• The template DNA;
• primers bahan menyambung hujung serpihan;
• thermostable enzim polimerase DNA;
• bahan kimia, memastikan operasi yang betul enzim;
• penampan penyelesaian diperlukan untuk penciptaan yang sesuai syarat-syarat bagi pertumbuhan dan perkembangan DNA material.

Untuk melaksanakan PCR beroperasi 25-30 ulangan terdiri daripada tiga langkah: penyahaslian, annealing dan pemanjangan.

Untuk menganalisis tindak balas rantai polimezarnoy menggunakan alat khas - sepeda. Peralatan moden membolehkan anda untuk memasang perlu pemanasan dan penyejukan tiub program untuk menghapuskan kesilapan semasa diagnosis.

Di mana untuk memohon diagnosis?

Polimezarnoy kaedah tindak balas rantai yang digunakan dalam pelbagai bidang perubatan:

• penggunaan forensik untuk mengenal pasti bahan genetik, seperti rambut, air liur atau darah;
• analisis PCR darah membantu untuk genotyping, mis untuk mengesan individu sambutan ditanam genetik untuk ubat-ubat tertentu;
• dengan kaedah menetapkan hubungan keluarga di antara manusia;
• Cara-PCR dicari paling telah menjadi dalam diagnosis perubatan bagi menentukan pelbagai penyakit berjangkit.

Apa jangkitan mendedahkan PCR?

Oleh itu, ubat-ubatan telah lama berjaya digunakan analisis PCR. Ada apa, kita telah belajar. Dan beberapa patogen boleh dikesan dengan ia? PCR didiagnosis berikut jangkitan :

• hepatitis A, B, C;
• ureaplasmosis;
• kandidiasis;
• chlamydia;
• mycoplasmosis;
• vaginosis bakteria;
• mononucleosis berjangkit;
• trichomoniasis;
• jangkitan HPV;
• batuk kering;
• jangkitan herpes daripada 1 dan jenis-2;
• Helicobacter pylori jangkitan;
• cytomegalovirus;
• difteria;
• Salmonellosis;
• jangkitan HIV.

Juga, kaedah PCR digunakan dalam diagnosis kanser.

kelebihan kaedah

Diagnostik PCR mempunyai beberapa kelebihan:

1. kepekaan yang tinggi. Walaupun dengan hanya beberapa molekul DNA mikroorganisma analisis PCR menentukan kehadiran jangkitan. Ia membantu kaedah untuk penyakit kronik dan terpendam berlaku. Selalunya dalam kes-kes itu, mikroorganisma adalah diusahakan dengan cara lain.
2. Untuk menyiasat apa-apa bahan yang sesuai, seperti air liur, darah, pemilihan seks, rambut, sel-sel epitelium. Yang paling biasa adalah ujian darah dan swab urogenital PCR.

3. Tidak memerlukan kultur yang dilanjutkan. Proses automatik diagnostik membolehkan untuk mendapatkan hasil kajian yang selepas 4-5 jam.
4. Kaedah ini adalah hampir sahih. Mencatatkan kes hanya diasingkan keputusan palsu-negatif.
5. Keupayaan untuk mengenal pasti beberapa jenis patogen dalam satu bahan sampel. Ini bukan sahaja mempercepatkan proses diagnosis penyakit, tetapi juga ketara mengurangkan kos material. Selalunya, doktor menetapkan analisis yang menyeluruh daripada PCR. kaji selidik harga, yang terdiri daripada menentukan enam patogen, adalah kira-kira 1500 Rubles.

Cadangan mengenai persediaan untuk analisis

Keputusan sah kajian PCR perlu diuji, berdasarkan cadangan dari persiapan awal untuk diagnosis:

1. Sebelum penghantaran air liur perlu menahan diri daripada makan dan ubat selama 4 jam sebelum pensampelan bahan. Sebaik sebelum prosedur, bilas mulut anda dengan air masak.
2. Peraturan di atas perlu dibimbing dan apabila mengambil sampel dari bahagian dalam pipi. Selepas membilas adalah disyorkan untuk menjalankan urutan ringan pada kulit untuk melepaskan rembesan prostatic.
3. Air kencing biasanya dikumpulkan di rumah. Untuk melakukan ini, anda perlu untuk menjalankan tandas teliti alat kelamin. Dalam bekas plastik steril adalah perlu untuk mengumpul 50-60 ml air kencing. Ia disyorkan untuk wanita untuk memasukkan tampon ke dalam faraj, tetapi manusia sebanyak mungkin menarik kulit kali ganda untuk memastikan kesucian bahan. Anda tidak boleh mengambil bahan semasa haid.
4. Untuk penghantaran sperma untuk menahan diri dari hubungan seks dalam tempoh 3 hari sebelum pengumpulan material. Juga, doktor dinasihatkan untuk meninggalkan penggunaan sauna dan mandian panas, alkohol dan makanan pedas. Untuk 3 jam sebelum analisis adalah perlu untuk menahan diri daripada membuang air kecil.
5. Untuk lulus smear urogenital, sebagai contoh, jika analisis pada chlamydia PCR, kedua-dua wanita dan lelaki adalah disyorkan bahawa sepanjang seksual selama 3 hari. 2 minggu sebelum analisis tidak boleh mengambil antibiotik. Selama seminggu anda perlu berhenti menggunakan intim gel, salap, faraj suppositories, douching. 3 jam sebelum kajian itu perlu menahan diri daripada membuang air kecil. Semasa haid bahan pagar tidak dijalankan, hanya 3 hari selepas penamatan spotting boleh mengambil smear urogenital.

PCR semasa mengandung

Tempoh menunggu untuk mengandung, banyak penyakit berjangkit, penyakit kelamin, adalah amat berbahaya untuk perkembangan janin normal. STD boleh mencetuskan pembangunan dalam kandungan, kelahiran keguguran atau pra-matang, kecacatan kongenital kanak-kanak. Oleh itu, adalah penting untuk mendapatkan dalam awal kehamilan saringan PCR. Lulus analisis adalah perlu semasa mendaftar - sehingga 12 minggu.

bahan pagar datang dari saluran serviks dengan berus khas. Prosedur ini tidak menyakitkan dan menimbulkan bahaya kepada bayi. Biasanya semasa mengandung dianalisis untuk kaedah Chlamydia PCR, serta ureaplasmosis, mycoplasmosis, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. kompleks pemeriksaan itu dipanggil PCR 6.

PCR untuk diagnosis HIV

Kerana kenyataan bahawa kaedah tindak balas rantai polymerase adalah sangat sensitif kepada perubahan dalam badan dan syarat-syarat diagnosis, banyak faktor boleh menjejaskan hasilnya. Oleh itu analisis PCR untuk jangkitan HIV bukan kaedah yang boleh dipercayai, kecekapan - 96-98%. Baki 2-4% daripada ujian memberikan hasil positif palsu.

Tetapi dalam sesetengah keadaan tanpa PCR diagnosis HIV tidak boleh buat. Selalunya, ia dijalankan kepada orang-orang yang palsu-negatif ELISA. Angka-angka ini menunjukkan bahawa seseorang itu belum lagi dibangunkan antibodi untuk virus dan tidak boleh dikesan tanpa meningkatkan jumlah berganda. Bahawa ini boleh dicapai dengan menjalankan kaedah PCR ujian darah.

Juga diperlukan ialah diagnosis kanak-kanak tahun pertama kehidupan, yang dilahirkan oleh ibu-ibu HIV positif. Kaedah ini adalah satu-satunya cara untuk pasti menentukan status anak itu.

PCR untuk diagnosis hepatitis

Polymerase kaedah tindak balas rantaian membolehkan pengesanan DNA virus hepatitis A, B, C, sebelum pembentukan antibodi kepada jangkitan atau gejala permulaan. Terutama berkesan adalah analisis PCR pada hepatitis C, sejak 85% daripada penyakit tersebut adalah asimptomatik dan tanpa rawatan tepat pada masanya menjadi kronik.

pengesanan tepat pada masanya patogen akan membantu mengelakkan komplikasi dan rawatan jangka panjang.

pemeriksaan bersepadu PCR

Menyeluruh Analisis PCR: apa yang ia? Ini saringan kaedah polimezarnoy rantaian tindak balas yang termasuk menentukan pada masa yang sama beberapa jangkitan spesies: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, candida, Trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealitikum, herpes 1 dan jenis 2, gonorea papillomavirus. Harga diagnosis ini adalah antara 2,000 hingga 3,500 Rubles. bergantung kepada klinik, bahan-bahan dan peralatan, dan juga kepada jenis analisis: kualitatif atau kuantitatif. Apa yang diperlukan dalam kes anda - doktor memutuskan. Dalam beberapa kes, anda hanya hanya mengesan kehadiran patogen pada orang lain, seperti HIV, peranan penting yang dimainkan oleh titer kuantitatif. dirujuk sebagai "analisis PCR 12" dalam diagnosis semua peperiksaan patogen di atas.

Mentafsir keputusan analisis

analisis transkripsi PCR adalah mudah. Terdapat hanya 2 skala indeks - ". Negatif" "positif" dan Apabila pengesanan doktor patogen 99% pasti untuk mengesahkan kehadiran penyakit ini dan memulakan rawatan pesakit. Dalam kaedah kuantitatif menentukan jangkitan pada nombor indeks lajur berkaitan dengan bakteria yang dikesan akan dinyatakan. Hanya doktor boleh menentukan tahap penyakit dan menetapkan rawatan yang diperlukan.

Dalam beberapa kes, sebagai contoh dalam menentukan jangkitan HIV oleh PCR, dengan keputusan yang negatif, terdapat keperluan untuk tinjauan tambahan untuk mengesahkan angka-angka ini.

Di mana untuk mendapatkan diuji?

Di mana pas-PCR analisis di klinik awam atau makmal swasta? Malangnya, dalam perubatan peralatan institusi perbandaran dan kaedah sering ketinggalan zaman. Oleh itu adalah lebih baik untuk memberi keutamaan kepada makmal swasta dengan peralatan moden dan kakitangan yang berkelayakan. Di samping itu, di klinik swasta anda mendapatkan hasil yang lebih cepat.

Di Moscow, banyak makmal swasta menawarkan analisis PCR untuk pelbagai jangkitan. Sebagai contoh, di klinik seperti "Vita", "Klinik Bersepadu," "Keluarga Bahagia", "Uro-Pro", menjalankan analisis PCR. Survey harga yang 200 Rubles. untuk menentukan patogen.

Dapat disimpulkan bahawa diagnosis penyakit berjangkit oleh PCR dalam kebanyakan kes adalah cara yang cepat dan boleh dipercayai untuk mengesan patogen dalam badan pada peringkat awal jangkitan. Namun, dalam kes-kes tertentu, untuk memilih kaedah lain diagnosis. Menentukan keperluan untuk kajian itu hanya boleh menjadi pakar. PCR analisis Penyahsulitan juga memerlukan pendekatan yang profesional. Ikut nasihat doktor anda dan tidak memberi ujian mereka sendiri, yang tidak diperlukan.